Використання методу протокової цитометрії для визначення вмісту Са2+ в мітохондріях та впливу на нього антагоністів кальмодуліну
eNUFTIR
Переглянути архів Інформація| Поле | Співвідношення | |
| Title |
Використання методу протокової цитометрії для визначення вмісту Са2+ в мітохондріях та впливу на нього антагоністів кальмодуліну
Использование метода проточной цитометрии для определения содержания Са2+ в митохондриях и влияние на него антагонистов кальмодулина Use of flow cytometry method to determine Ca2+ content in mitochondria and influence of calmodulin antagonists on it |
|
| Creator |
Бабіч, Л. Г.
Шликов, С. Г. Наумова (Кандаурова), Н. В. Костерін, С. О. Бабич, Л. Г. Шлыков, С. Г. Наумова (Кандаурова), Н. В. Костерин, С. А. Babich, L. Shlykov, S. Naumova (Kandaurova), N. Kosterin, S. |
|
| Subject |
протокова цитометрія
проточная цитометрия flow cytometry ізольовані мітохондрії Са2+ мембранний потенціал мітохондрій гладенькі м’язи изолированные митохондрии мембранный потенциал Са2+ гладкие мышцы isolated mitochondria membrane potential Ca2+ smooth muscles |
|
| Description |
Для дослідження акумуляції іонів Са в ізольованих мітохондріях міометрія використовували метод протокової цитометрії та флуоресцентні зонди. Внесення 1 мМ Са2+ до середовища інкубації, яке містило навантажені зондом fluo 3-AM мітохондрії, за присутності в ньому 5 мкМ кальцієвого іонофору А-23187 зміщувало геометричне положення піка інтенсивності флуоресценції зонда вправо. Збільшення інтенсивності його флуоресценції залежало від концентрації іонів Са в середовищі: підвищення її від 20 мкМ до 1 мМ за наявності в суспензії кальцієвого іонофору А-23187 зумовлювало зростання інтенсивності випромінювання. В разі моделювання функціонування Са2+-уніпортеру мітохондрій спостерігалось Са2+-індуковане збільшення інтенсивності флуоресценції зонда fluo 3-АМ залежно від концентрації катіона: за введення до суспензії 1 мкМ протонофору СССР та 20 мкМ Са2+ інтенсивність флуоресценції зонда залишалась на рівні контролю. У подальших експериментах вивчали вплив антагоністів кальмодуліну – кальмідазоліуму та трифлуопіразину – на вміст в мітохондріях іонізованого Са. Внесення 10 мкМ кальмідазоліуму або 100 мкМ трифлуопіразину до середовища інкубації повністю пригнічувало в органелах акумуляцію Са2+. При цьому, використовуючи потенціалочутливий флуоресцентний зонд TMRM, було встановлено, що антагоністи кальмодуліну також спричинюють деполяризацію мітохондріальної мембрани. Припускається, що гальмування надходження іонів Са до мітохондрій міометрія у присутності антагоністів кальмодуліну може відбуватися як через блокування утворення комплексу Са2+–кальмодулін і, відповідно, інгібування функціонування Са2+-уніпортеру, так і/або дисипацію мембранного потенціалу Δψ – рушійної сили акумуляції Са2+ в мітохондріальному матриксі.
Аккумуляцию ионов Са в изолированных митохондриях миометрия исследовали с использованием метода проточной цитометрии и флуоресцентного зонда fluo 3-AM. Внесение в среду инкубации 1 мМ Са2+ и 5 мкМ А23187 приводит к смещению вправо геометрического положения пика интенсивности флуоресценции зонда сравнительно с отсутствием в среде ионов Са. Интенсивность флуоресценции зонда повышается при увеличении в растворе концентрации Са2+. В условиях моделирования функционирования Са2+-унипортера интенсивность флуоресценции зонда также возрастает с увеличением в среде концентрации Са2+, но не изменяется при предварительном введении в нее 1 мкМ протонофора СССР. Внесение в среду инкубации антагонистов кальмодулина – 10 мкМ кальмидазолиума или 100 мкМ трифлуопиразина – приводит к полному ингибированию накопления Са2+ в митохондриях. Эти антагонисты кальмодулина вызывают также деполяризацию митохондриальной мембраны, что было установлено в экспериментах с использованием потенциалчувствительного флуоресцентного зонда TMRM. Высказывается предположение о том, что ингибирующее действие антагонистов кальмодулина на аккумуляцию ионов Са в митохондриях миометрия может происходить как при ингибировании непосредственно Са2+-унипортера, так/или вследствие диссипации мембранного потенциала. Ca ions accumulation in isolated myometriummitochondria was investigated using flow cytometry and fluorescent probe fluo 3-AM. The addition of 1 mM of Ca2+ and 5 μM of A23187 to the incubation medium resulted in the shift to the right of geometrical peak position of fluorescence probe intensity compared with that registered in the absence of Ca ions. The increase of Ca concentration in the medium resulted in the increase of fluorescence intensity. In the conditions of Ca2+-uniporterfunctioning modelling the probe fluorescence intensity also increased depending on an increase of Ca concentration and did not change at primary presence of the 1 μM CCCP. Ca2+ accumulation in mitochondria was completely inhibited by 10 μМ calmidazolium or 100 μМ trifluoperazine, known as calmodulin antagonists. It was also shown that these calmodulin antagonists caused mitochondria membrane depolarization. The membrane potential was measured using fluorescent probe TMRM. It is supposed that the inhibitory action of calmodulin antagonists on Са ions accumulation in myometrium mitochondria can occur due to direct inhibition of Ca2+-uniporter and/or due to membrane potential dissipation. |
|
| Date |
2012-11-13T09:50:39Z
2012-11-13T09:50:39Z 2008 |
|
| Type |
Article
|
|
| Identifier |
Використання методу протокової цитометрії для визначення вмісту Са2+ в мітохондріях та впливу на нього антагоністів кальмодуліну, Бабіч Л.Г., Шликов С.Г., Наумова (Кандаурова) Н.В., Костерін С.О., Укр. біохім. журн. – 2008. – Т. 80, № 4. – С. 51-58
http://dspace.nuft.edu.ua/jspui/handle/123456789/3652 |
|
| Language |
other
|
|