Створення та характеристика імунної комбінаторної бібліотеки кДНК варіабельних генів імуноглобулінів миші
Vernadsky National Library of Ukraine
Переглянути архів Інформація| Поле | Співвідношення | |
| Title |
Створення та характеристика імунної комбінаторної бібліотеки кДНК варіабельних генів імуноглобулінів миші
|
|
| Creator |
Павлова, М.В.
Гільчук, П.В. Похоленко, Я.О. Ніколаєв, Ю.С. Кордюм, В.А. |
|
| Subject |
Оригинальные работы
|
|
| Description |
Сконструйовано комбінаторну бібліотеку кДНК варіабельних генів імуноглобулінів мишей, імунізованих рекомбінантним інтерфероном β1b людини (rhIFN-β1b). Для цього ампліфіковану зі спленоцитів кДНК варіабельних генів важких (VH) і легких (VL) ланцюгів імуноглобулінів об’єднували лінкерною ДНК у складі послідовностей одноланцюгових антитіл – ScFv’s (single chain Fv antibodies). Одержаний пул ScFv-ДНК було клоновано у фагмідному векторі і використано для трансформації Escherichia coli. З використанням методу фагового дисплея відібрано бактеріальні клони, які продукують специфічні до rhIFN-β1b ScFv’s. У роботі встановлено такі характеристики створеної бібліотеки, як представленість, функціональний розмір та вихідне різноманіття послідовностей ScFv-ДНК. Продемонстровано високу специфічність взаємодії виділених фаговим дисплеєм ScFv’s з rhIFN-β1b.
Была сконструирована комбинаторная библиотека кДНК вариабельных генов иммуноглобулинов мышей, иммунизированных рекомбинантным интерфероном β1b человека (rhIFN-β1b). Для этого амплифицированную из спленоцитов кДНК вариабельных генов тяжелых (VH) и легких (VL) цепей иммуноглобулинов объединяли линкерной ДНК в составе последовательностей одноцепочечных антител – ScFv’s (single-chain Fv-antibodies). Полученный пул ScFv-ДНК был заклонирован в фагемидный вектор и использован для трансформации клеток Escherichia coli. С использованием метода фагового дисплея отобраны бактериальные клоны, которые продуцируют специфические к rhIFN-β1b одноцепочечные антитела. В работе определены такие характеристики созданной библиотеки, как представленность, функциональный размер, а также исходное разнообразие последовательностей ScFv-ДНК. Продемонстрирована высокая специфичность взаимодействия ScFv, выделенных с помощью фагового дисплея, с rhIFN-β1b. A cDNA combinatorial antibody library of mouse variable immunoglobulin fragments has been constructed from mice immunized with rhIFN-β1b. For this purpose, cDNAS of immunoglobulin variable heavy (VH) and variable light (VL) chains genes amplified from splenocytes were joined with linker DNA to form ScFv’s (single-chain Fv-antibodies). The obtained ScFv-DNA pool was cloned into a phagemid vector and used for Escherichia coli transformation. Using the phage display technique, bacterial clones producing single-chain antibodies specific to rhIFN-β1b were selected. The following characteristics of the combinatorial library were determined in this work: abundance, functional size, and the initial ScFv-DNA diversity in the library constructed. High specificity of interaction between phage displayed ScFv’s and rhIFN-β1b has been demonstrated. |
|
| Date |
2010-04-29T11:06:26Z
2010-04-29T11:06:26Z 2008 |
|
| Type |
Article
|
|
| Identifier |
Створення та характеристика імунної комбінаторної бібліотеки кДНК варіабельних генів імуноглобулінів миші / М.В. Павлова, П.В. Гільчук, Я.О. Похоленко, Ю.С. Ніколаєв, В.А. Кордюм // Цитология и генетика. — 2008. — Т. 42, № 2. — С. 10-15. — Бібліогр.: 12 назв. — укp.
0564-3783 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/8078 579.69 : 577.12 |
|
| Language |
uk
|
|
| Publisher |
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
|
|