Дослідження взаємодії ізольованого С-модуля тирозил-тРНК синтетази з тРНК методом флуоресцентної спектроскопії
Vernadsky National Library of Ukraine
Переглянути архів Інформація| Поле | Співвідношення | |
| Title |
Дослідження взаємодії ізольованого С-модуля тирозил-тРНК синтетази з тРНК методом флуоресцентної спектроскопії
|
|
| Creator |
Кордиш, М.О.
Корнелюк, О.І. |
|
| Subject |
Структура та функції біополімерів
|
|
| Description |
Не каталітичний С-модуль тирозил-тРНК синтетази ссавців має подвійну функцію: бере участь у зв' язуванні тРНК як цис-фактор та після протеолітичного відщеплення від каталітичного кора синтетази проявляє иитокінову активність подібно до цитокіну ЕМАР II. С-модуль TyrRS містить залишок триптофану Trp144, який є флуоресцентним зондом у структурі білка, однак локалізований поза сайтом зв'язування РНК. Для дослідження взаємодії ізольованого С-модуля з тРНК консервативний ароматичний залишок (Phe) 127 у РНК-зв' язу вальному центрі методами сайт-спрямованого мутагенезу було замінено на флуорофор Trp127. Це дозволило суттєво підвищити квантовий вихід флуоресценції білка та визначити параметри зв'язування С-модуля з тРНК. На основі даних спектрофлуориметричного титрування визначено величину константи дисоціації комплексу С-модуля з тPHK (Phe), яка складає 2,9-10⁻⁸ М, та стехіометрію комплексу (n = 1,2).
The non-catalytic COOH-terminal module of mammalian tyrosyl-tRNA synthetase manifests a dual function: involvement in tRNA binding as a cis-factor and cytokine activity after proteolytic cleavage from synthetase catalytic core similar to EMAP II cytokine. The C-module of TyrRS contains a single Trp144 which is an intrinsic fluorescent probe in protein structure, but it is localized outside of RNA binding site. To explore the interaction between C-module and tRNA in solution the conservative aromatic (Phe) 127 residue was substituted for Trp127 fluorophore by site-directed mutagenesis. This replacement allowed enhancing the protein quantum yield and determining the binding parameters of tRNA and C-module. The dissociation constant of the complex between C-module and tRNA (Phe) was calculated on the basis of spectrofluorometric titrations data. It was about 2,9-10⁻⁸ M, and stoichiometry of the complex n=1.2. Некаталитический С-модуль тирозил-тРНК синтетазы млекопитающих выполняет двойную функцию: участвует в связывании тРНК как цис-фактор и при протеолитическом расщеплении от каталитического кора синтетазы проявляет цитокиновую активность подобно цитокину ЕМАР II. С-модуль TyrRS содержит остаток триптофана Trp144, который является флуоресцентним зондом в структуре белка, однако локализован вне сайта связывания РНК. Для исследования взаимодействия изолированного С-модуля с тРНК консервативный ароматический остаток (Phe) 127 в РНК-связывающем центре был заменен на флуорофор Trp127 методами сайт-направленного мутагенеза. Это позволило существенно повысить квантовый выход флуоресценции белка и определить параметры связывания С-модуля с тРНК. На основе данных спектрофлуориметрического титрования определены величина константы диссоциации комплекса С-модуля с тPHK (Phe), которая составляет 2,9-10⁻⁸ М, и стехиометрия комплекса (n = 1,2). |
|
| Date |
2019-06-18T20:24:11Z
2019-06-18T20:24:11Z 2006 |
|
| Type |
Article
|
|
| Identifier |
Дослідження взаємодії ізольованого С-модуля тирозил-тРНК синтетази з тРНК методом
флуоресцентної спектроскопії / М.О. Кордиш, О.І. Корнелюк // Біополімери і клітина. — 2006. — Т. 22, № 4. — С. 283-289. — Бібліогр.: 23 назв. — укр.
0233-7657 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156780 577.322 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.00073A |
|
| Language |
uk
|
|
| Relation |
Біополімери і клітина
|
|
| Publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
|
|